Разница между страницей SDS и вестерн-блотом

2024 Автор: Mildred Bawerman | [email protected]. Последнее изменение: 2023-12-16 08:42

Ключевое различие - страница SDS vs Western Blot

Вестерн-блоттинг - это метод, позволяющий обнаружить определенный белок в образце белка. Этот метод выполняется в несколько основных этапов: гель-электрофорез, блоттинг и гибридизация. Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS Page) - это метод гель-электрофореза, который используется для разделения белков в соответствии с их размерами (молекулярной массой). Вестерн-блоттинг - это специальный лист мембраны для блоттинга, который используется для переноса того же образца белков на SDS-странице. Ключевое различие между SDS Page и вестерн-блоттингом заключается в том, что SDS Page позволяет разделять белки в смеси, тогда как вестерн-блот позволяет обнаруживать и количественно определять конкретный белок из смеси. Оба они полезны в исследованиях анализа белков.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Обзор и основные различия

2. Что такое страница SDS

3. Что такое вестерн-блот

4. Параллельное сравнение - страница SDS и вестерн-блот

5. Резюме

Что такое страница SDS?

SDS Page - это метод гель-электрофореза, используемый для разделения белков. Он обычно используется в биохимии, генетике, судебной медицине и молекулярной биологии. После извлечения белков из образца они наносятся на гель, состоящий из SDS и полиакриламида. SDS - это анионный детергент, который используется для линеаризации белков (денатурирования белков) и придания отрицательного заряда линеаризованным белкам, пропорциональному их молекулярной массе. Полиакриламид становится твердой подложкой для геля. Отрицательно заряженные денатурированные белки мигрируют к положительному концу устройства через гель. В зависимости от размера белков скорость миграции между белками различается, и происходит разделение. Таким образом, страница SDS полезна для разделения отдельных белков на основе их размеров.

Приготовление полиакриламидного геля для фракционирования белков является важным этапом в SDS Page. Правильная концентрация полиакриламида и тип используемого сшивающего агента сильно влияют на физические свойства геля, что приводит к фактическому разделению различных белков. Для эффективного разделения необходимо правильно регулировать размер пор геля. Однако SDS Page считается методом разделения белков с высоким разрешением.

Метод SDS Page имеет большое ограничение в анализе белков. Поскольку SDS денатурирует белки перед разделением, он не позволяет обнаруживать ферментативную активность, взаимодействия связывания белков, кофакторы белков и т. Д.

Рисунок 01: Страница SDS

Что такое вестерн-блоттинг?

Метод вестерн-блоттинга позволяет обнаруживать определенный белок в смеси белков и измерять количество и молекулярную массу белка. Вестерн-блоттинг - это мембрана, используемая во время процедуры блоттинга для получения зеркального отражения структуры белков в SDS-полиакриламидном геле. Мембрана, которая используется для вестерн-блоттинга, в основном состоит из нитроцеллюлозы или поливинилидендифторида (ПВДФ). Мембрана с перенесенным белком может использоваться для идентификации желаемого белка. Требуются высококачественные антитела для обнаружения желаемого белка путем гибридизации. Антитело связывается со своим специфическим антигеном и выявляет присутствие желаемого антигена, который является белком.

Перенос белков из полиакриламидного геля SDS в вестерн-блоттинг выполняется электроблоттингом. Это эффективный и быстрый метод, при котором белки электрофорезом выходят из геля и переходят на нитроцеллюлозную мембрану (вестерн-блоттинг).

Рисунок 02: Вестерн-блоттинг

В чем разница между SDS Page и Western Blot?

Различать статью в середине перед таблицей

SDS Page против вестерн-блоттинга
SDS Page - это метод гель-электрофореза.	Вестерн-блоттинг - это метод, который выполняется на мембране для обнаружения определенного белка из смеси.
Использовать
Страница SDS позволяет разделить белки по размеру.	Вестерн-блоттинг позволяет переносить белки на гель SDS page без изменения его структуры и позволяет гибридизоваться со специфическими антителами.
Недостатки
Денатурация белков, высокая стоимость и присутствие нейротоксинов являются недостатками этого метода.	Этот метод требует много времени и требует личного опыта и определенных контролируемых условий.

Резюме - Страница SDS против вестерн-блоттинга

SDS-страница и вестерн-блоттинг - это два метода анализа белков. SDS Page позволяет легко разделить белки на геле в соответствии с их молекулярной массой. Вестерн-блоттинг помогает подтвердить наличие и количество определенного белка посредством гибридизации со специфическими антителами. В этом разница между SDS Page и вестерн-блоттингом.