Ключевое различие - страница SDS и страница с исходным кодом
SDS и нативный пейдж - это два типа методов электрофореза в полиакриламидном геле, используемых в молекулярной биологии. Ключевое различие между SDS Page и Native Page - это тип используемого полиакриламидного геля. В SDS Page используется денатурирующий гель, поэтому молекулы разделяются на основе их молекулярной массы. Напротив, в Native Page используются неденатурирующие гели. Таким образом, молекулы разделяются по размеру, заряду и форме.
Электрофорез в полиакриламидном геле (Пейдж) использует гель, полученный путем полимеризации мономеров акриламида с метиленбисакриламидом. Полиакриламид более жесткий и термостойкий, чем агароза. Полиакриламидные гели имеют меньший размер пор, что обеспечивает эффективное разделение белков. Существует два основных типа настроек страницы: SDS-страница и собственная страница. SDS Page или электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия позволяет разделять белки на основе их молекулярных масс. Денатурирующие гели используются в SDS Page. Native Page использует неденатурирующие гели и разделяет белки в зависимости от их размера, заряда и формы (трехмерная конформация).
СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные различия
2. Что такое страница SDS
3. Что такое собственная страница
4. Сходства между страницей SDS и исходной страницей
5. Параллельное сравнение - страница SDS и собственная страница в табличной форме
6. Резюме
Что такое страница SDS?
SDS Page - это наиболее распространенный электрофоретический метод, используемый для разделения белков на основе их молекулярной массы. Гель изготавливается путем добавления моющего средства SDS (додецилсульфат натрия). SDS превращает протеины в мономеры. SDS - это анионное моющее средство. Следовательно, он добавляет чистый отрицательный заряд к белкам в широком диапазоне pH. Когда чистый отрицательный заряд передается молекулам белка из-за изменения заряда, сложные структуры разрушаются. Из-за отрицательного заряда белки притягиваются к положительному концу. Таким образом, молекулы с более низкой молекулярной массой перемещаются по гелевой матрице быстрее и могут наблюдаться вблизи анода, тогда как белки с более высокой молекулярной массой наблюдаются ближе к лункам.
Рисунок 01: Страница SDS
Связывание SDS с полипептидной цепью пропорционально его относительной молекулярной массе. Следовательно, молекулярную массу также можно определить с помощью SDS Page. Окрашивание гелей SDS Page осуществляется путем окрашивания бромфеноловым синим. Приложения страницы SDS расширяются в большей степени, когда ее можно использовать для оценки относительной молекулярной массы и определения относительного содержания белков в смеси белков. SDS Page также может использоваться для определения распределения белков в смеси белков. SDS Page также применяется для очистки и оценки белков. Он используется в качестве предварительной процедуры для вестерн-блоттинга и гибридизации, которая, в свою очередь, используется для картирования и идентификации белков.
Что такое нативная страница?
Для электрофореза в полиакриламидном геле в нативном полиакриламиде (Native Page) используется неденатурирующий гель. Следовательно, SDS или любой другой денатурирующий агент не добавляется к гелевой матрице. В Native Page разделение белков основано на заряде и размере белка. Следовательно, подвижность белка зависит от заряда и размера белка.
Заряд белка зависит от боковых цепей аминокислот. Если боковые цепи заряжены отрицательно, белок получит общий отрицательный заряд, и наоборот. Белки сохраняют трехмерную конформацию благодаря происходящему сворачиванию. Сворачивание является результатом нескольких типов связей в белках, таких как дисульфидные связи, гидрофобные взаимодействия и водородные связи. Следовательно, если нативный пейдж переносится при нейтральном pH, белки будут разделены в соответствии с молекулярной формой белка. Следовательно, Native Page может использоваться в качестве чувствительного метода для обнаружения изменения заряда или конформации белка.
Основным преимуществом нативной страницы является то, что белок, используемый для анализа страницы, может быть восстановлен в исходном состоянии после анализа страницы, так как белок не нарушается во время процесса. Native Page - это метод с относительно высокой пропускной способностью, и стабильность белка повышена.
Рисунок 02: Собственная страница
После завершения прогона гель Native Page можно просмотреть, окрашивая бромфеноловым синим или любым другим подходящим окрашивающим реагентом. Приложения Native Page включают разделение кислых белков, включая гликопротеины, такие как рекомбинантный эритропоэтин человека, или идентификацию белков, присутствующих в альбумине бычьей сыворотки (БСА).
Каковы сходства между страницей SDS и собственной страницей?
- В системах SDS Page и Native Page в качестве матрицы геля используется полиакриламидный гель.
- Оба используются для разделения и идентификации белков.
- Оба используют электрофоретическую подвижность для разделения соединений.
- И то, и другое может быть выполнено как вертикально, так и горизонтально (в основном это делается как вертикальная настройка страницы, потому что длина тиража больше).
- Аппарат для электрофореза, включающий резервуар для геля, гребенки, источник питания, необходим для работы обоих методов.
- Визуализация геля может быть осуществлена методами окрашивания в обоих методах.
В чем разница между страницей SDS и собственной страницей?
Различать статью в середине перед таблицей
Страница SDS против исходной страницы |
|
| SDS Page или Sodium-dodecyl sulfate Page разделяет белки в зависимости от их молекулярной массы и использует денатурирующий гель. | Native Page использует неденатурирующие гели и разделяет белки в зависимости от их размера, заряда и формы (трехмерная конформация). |
| Тип геля | |
| В SDS-паж используется денатурирующий гель. | В исходной странице используется неденатурирующий гель. |
| Наличие SDS | |
| SDS присутствует как моющее средство для придания отрицательного заряда образцу на странице SDS. | SDS отсутствует на родной странице. |
| Основание разделения | |
| Разделение белков зависит от молекулярной массы белка на странице SDS. | Разделение зависит от размера и формы белковой молекулы на исходной странице. |
| Стабильность белка | |
| Стабильность белка на странице SDS низкая. | Стабильность белка на родной странице высокая. |
| Восстановление исходного белка | |
| Невозможно, так как он денатурирован на странице SDS. | Возможно на родной странице. |
Сводка - страница SDS и исходная страница
SDS Page и Native Page - это два типа методов электрофореза в полиакриламидном геле, используемых для разделения белков. SDS Page обрабатывается моющим средством SDS. SDS передает общий отрицательный заряд белку, что затем приводит к денатурации белка. Следовательно, белки разделяются на основе их молекулярной массы. Напротив, метод Native Page не использует никаких денатурирующих агентов. Таким образом, белки разделяются либо по размеру, либо по форме. В этом разница между страницей SDS и собственной страницей.
