Разница между северным южным и вестерн-блоттингом

2024 Автор: Mildred Bawerman | [email protected]. Последнее изменение: 2023-12-16 08:42

Ключевое различие - северный против южного против вестерн-блоттинга

Обнаружение конкретных последовательностей ДНК, РНК и белков важно для различных типов исследований в области молекулярной биологии. Гель-электрофорез - это метод разделения ДНК, РНК и белков в соответствии с их размерами. Из профилей геля определенная последовательность ДНК, последовательность РНК или белок определяется с помощью специальных методов, называемых блоттингом и гибридизацией с мечеными зондами. Существует три различных метода блоттинга: южный, северный и западный. Ключевое различие между северным саузерн-блоттингом и вестерн-блоттингом заключается в типе молекулы, которую он обнаруживает в образце. Саузерн-блоттинг - это метод обнаружения определенной последовательности ДНК в образце ДНК. Нозерн-блоттинг - это метод, который определяет конкретную последовательность РНК из образца РНК. Вестерн-блоттинг - это метод обнаружения определенного белка в образце белка.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Обзор и основные отличия

2. Что такое Саузерн-блоттинг

3. Что такое Нозерн-блоттинг

4. Что такое Вестерн-блоттинг

5. Параллельное сравнение - Нозерн-блоттинг, Саузерн и Вестерн-блоттинг

6. Резюме

Что такое Саузерн-блоттинг?

Техника саузерн-блоттинга была разработана EM Southern в 1975 году для идентификации конкретной последовательности ДНК из образца ДНК. Это первый метод блоттинга, представленный в молекулярной биологии. Это позволило обнаружить определенные гены в ДНК, определенные фрагменты ДНК и т. Д. Техника саузерн-блоттинга включает несколько этапов. Они следующие.

1. ДНК выделяется из образца и расщепляется эндонуклеазами рестрикции.
2. Переваренный образец разделяют электрофорезом в агарозном геле.
3. Фрагменты ДНК в геле денатурируют в отдельные цепи с помощью щелочного раствора.
4. Одноцепочечная ДНК переносится на мембрану нитроцеллюлозного фильтра капиллярным переносом.
5. Перенесенная ДНК постоянно фиксируется на мембране.
6. Фиксированная ДНК на мембране гибридизируется с мечеными зондами.
7. Несвязанная ДНК смывается с мембраны промыванием.
8. Рентгеновскую пленку экспонируют на мембране и готовят авторадиограф.

Саузерн-блоттинг применяется для различных аспектов молекулярной биологии. Это полезно при картировании RFLP, судебно-медицинских исследованиях, метилировании ДНК при экспрессии генов, обнаружении мутировавших генов при генетических заболеваниях, снятии отпечатков пальцев ДНК и т. Д.

Рисунок 01: Техника саузерн-блоттинга

Что такое Нозерн-блоттинг?

Нозерн-блоттинг - это метод, разработанный для обнаружения определенной последовательности РНК или последовательности мРНК в образце с целью изучения экспрессии гена. Этот метод был разработан Альвином, Кемпом и Старком в 1979 году. Он отличается от методов кислого и вестерн-блоттинга несколькими этапами. Однако этот метод также выполняется с помощью гель-электрофореза, блоттинга и гибридизации со специфическими мечеными зондами и обнаружения. Техника нозерн-блоттинга выполняется следующим образом.

1. РНК извлекается из образца и разделяется гель-электрофорезом.
2. РНК переносится из геля на мембрану для блоттинга и фиксируется.
3. Мембрану обрабатывают меченым зондом, полученным из кДНК или РНК (зонд комплементарен определенной последовательности в образце).
4. Зонд инкубируется с мембраной для связывания с определенной последовательностью.
5. Несвязанные зонды смываются.
6. Гибридизованные фрагменты обнаруживают с помощью авторадиографа.

Нозерн-блоттинг - важный инструмент для обнаружения и количественной оценки гибридизированной мРНК, изучения деградации РНК, оценки периода полужизни РНК, обнаружения сплайсинга РНК, изучения экспрессии генов и т. Д.

Рисунок 02: Нозерн-блоттинг

Что такое вестерн-блоттинг?

Вестерн-блоттинг - это метод обнаружения определенного белка в смеси белков с использованием меченых антител. Поэтому вестерн-блоттинг также известен как иммуноблот. Этот метод был введен Towbin и др. В 1979 году, и теперь он регулярно применяется в лабораториях для анализа белков. Шаги следующие.

1. Белки извлекаются из образца
2. Белки разделяют по размеру с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.
3. Разделенные молекулы переносятся на мембрану из ПВДФ или нитроцеллюлозную мембрану путем электропорации.
4. Мембрана заблокирована для неспецифического связывания с антителами.
5. Перенесенные белки связываются с первичными антителами (антителами, меченными ферментами).
6. Мембрану промывают для удаления неспецифически связанных первичных антител.
7. Связанные антитела обнаруживают путем добавления субстрата и обнаружения образовавшегося окрашенного осадка.

Вестерн-блоттинг полезен при обнаружении антител против ВИЧ в образце сыворотки человека. Вестерн-блоттинг также можно использовать в качестве подтверждающего теста на инфекцию гепатита В и окончательного теста на коровье бешенство.

Рисунок 03: Вестерн-блоттинг

В чем разница между северным южным и вестерн-блоттингом?

Различать статью в середине перед таблицей

Северный против Южного против Вестерн-блоттинга
Тип обнаруженной молекулы
Нозерн-блоттинг	Нозерн-блоттинг обнаруживает определенную последовательность РНК из образца РНК.
Саузерн-блоттинг	Саузерн-блоттинг обнаруживает конкретную последовательность ДНК из образца ДНК.
Вестерн-блоттинг	Вестерн-блоттинг определяет конкретный белок в образце белка.
Тип геля
Нозерн-блоттинг	При этом используется гель агарозы / формальдегида.
Саузерн-блоттинг	Для этого используется гель агарозы.
Вестерн-блоттинг	Для этого используется полиакриламидный гель.
Метод блоттинга
Нозерн-блоттинг	Это капиллярный перенос.
Саузерн-блоттинг	Это капиллярный перенос.
Вестерн-блоттинг	Это электрическая передача.
Используемые зонды
Нозерн-блоттинг	кДНК или РНК-зонды, меченные радиоактивно или нерадиоактивно.
Саузерн-блоттинг	Зонды ДНК имеют радиоактивную или нерадиоактивную метку.
Вестерн-блоттинг	В качестве зондов используются первичные антитела.
Система обнаружения
Нозерн-блоттинг	Это делается с помощью авторадиографа или обнаружения изменения света или цвета.
Саузерн-блоттинг	Это делается с помощью авторадиографа, обнаружения света или изменения цвета.
Вестерн-блоттинг	Это делается с помощью обнаружения света или изменения цвета.

Заключение - Северный против Южного против Вестерн-блоттинга

Блоттинг - это специальный метод, разработанный для идентификации конкретных ДНК, РНК или белков в образцах. Существует три отдельных метода блоттинга, а именно северный, южный и западный, для обнаружения определенного типа молекулы. Метод Нозерн-блоттинга разработан для обнаружения конкретной последовательности РНК из смеси РНК. Метод саузерн-блоттинга позволяет обнаруживать конкретную последовательность ДНК в образце ДНК, а метод вестерн-блоттинга разработан для идентификации конкретного белка из смеси белков.