Ключевое различие - бумага против тонкого слоя против колоночной хроматографии
Бумажная хроматография, тонкослойная хроматография и колоночная хроматография - это три типа хроматографических методов. Ключевое различие между бумажной хроматографией, тонкослойной хроматографией и колоночной хроматографией основано на типе стационарной фазы, используемой в методике хроматографии. В бумажной хроматографии в качестве стационарной фазы используется целлюлозная бумага, в тонкослойной хроматографии в качестве стационарной фазы используется оксид алюминия или силикагель, а в колоночной хроматографии в качестве стационарной фазы используется колонка, заполненная подходящим матричным материалом.
В процессе разделения и идентификации биомолекул, таких как белки и углеводы, важным биофизическим методом является хроматография. Хроматография разделяет соединения в зависимости от их растворимости, размера и заряда. Основываясь на механизме разделения, хроматография использует такие механизмы, как ионный обмен, абсорбция, распределение и исключение по размеру, и существует три хроматографических метода; а именно бумажная, тонкослойная и колоночная хроматография. Бумажная хроматография основана на адсорбции твердого вещества и жидкости и растворимости соединения, а в качестве стационарной фазы используется целлюлозная бумага. Тонкослойная хроматография основана на адсорбции молекул твердой жидкостью. Он имеет неподвижную фазу, которая обычно состоит из оксида алюминия или силикагеля, и подвижную фазу, которая является растворителем. В колоночной хроматографии используется колонка, заполненная матрицей, которая используется для разделения молекул в основном на основе их размера, сродства или заряда.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор хроматографии и основные различия
2. Что такое бумажная хроматография
3. Что такое тонкослойная хроматография
4. Что такое колоночная хроматография
5. Сходства между бумажной, тонкослойной и колоночной хроматографией
6. Сравнение бок о бок - бумага против тонкого слоя и Колоночная хроматография в табличной форме
7. Резюме
Что такое бумажная хроматография?
Бумажная хроматография - это простейший вид хроматографии, который не используется для обширных исследований. Он в основном используется в студенческих лабораториях для идентификации биомолекул, таких как аминокислоты и углеводы, присутствующих в смесях. В бумажной хроматографии используется неподвижная фаза, изготовленная из целлюлозной бумаги или фильтровальной бумаги Whatman, и подвижная фаза, которую обычно получают с использованием органических растворителей, таких как н-бутанол и т. Д. Стационарная фаза насыщена водой, что делает неподвижную фазу жидкой. Таким образом, когда на соединениях наносят пятна и дают возможность работать в присутствии подвижной фазы, в зависимости от растворимости соединений, они разделяются. Таким образом, после разработки хроматограммы можно провести окрашивание для определения длины цикла каждого соединения. Таким образом можно рассчитать коэффициент удерживания.
Рисунок 01: Бумажная хроматография
Бумажная хроматография может быть дополнительно классифицирована как восходящая бумажная хроматография и нисходящая бумажная хроматография в зависимости от направления движения растворителя.
Что такое тонкослойная хроматография?
Тонкослойная хроматография или ТСХ - широко используемый метод для идентификации различных аминокислот, присутствующих в смеси, или для идентификации белков. Техника разделения основана на адсорбции твердое вещество-жидкость. При тонкослойной хроматографии пластинка из оксида алюминия или силикагеля используется в качестве неподвижной фазы. Смесь растворителей варьируется в зависимости от требований и может использовать различные комбинации органических соединений, таких как н-бутанол, уксусная кислота и вода, для приготовления растворителя. Разделяемые соединения наносят на пластину пятнами и погружают в смесь растворителей. Как только растворитель поднимается из-за капиллярного действия, создаваемого пластиной, соединения, нанесенные на пластину, также перемещаются в зависимости от их растворимости в растворителе.
Рисунок 02: Тонкослойная хроматография
Обнаружение пятен после хроматограммы проводится с помощью различных процедур окрашивания. Некоторые используют окрашивание нингидрином, что является довольно токсичным методом окрашивания. Современные тонкослойные хроматограммы используют флуоресцентные методы для просмотра хроматограммы после цикла. В зависимости от пройденного расстояния можно рассчитать время удерживания каждого соединения. Это может быть использовано для определения типа разделенного соединения на основе используемой смеси. ТСХ в основном используется для идентификации аминокислот в смеси белков, а также для разделения различных типов моносахаридов, присутствующих в смеси.
Что такое колоночная хроматография?
Колоночная хроматография - это широкий термин, используемый для описания многих типов хроматографических методов, в которых используется метод разделения на основе колонок. В колоночной хроматографии используется физическая колонка с насадочным материалом для разделения соединений. Разделение может быть основано на различных физических свойствах соединений. Этими свойствами могут быть заряд, размер, трехмерная конформация и связывающая способность и т. Д. Таким образом, колонка, заполненная материалом матрицы, действует как стационарная фаза, а промывочный буфер, нанесенный на колонку, действует как подвижная фаза.
Если молекулы разделены по размеру, упаковочный материал упаковывается таким образом, что оставляет поры для прохождения соединений. Таким образом, сначала элюируются более крупные молекулы, которые не могут проходить через поры, тогда как более мелким молекулам требуется гораздо больше времени для элюирования.
Рисунок 03: Колоночная хроматография
Если молекулы разделены на основе их заряда, неподвижная фаза будет содержать либо анион, либо катионообменник, к которому соединения будут притягиваться в зависимости от их заряда. Таким образом, во время стадии промывки несвязанные соединения будут элюированы. После добавления буфера для элюирования связанные заряженные соединения будут элюированы. Обнаружение этих элюентов в основном основано на спектрофотометрических методах.
Каковы сходства между тонкослойной и колоночной хроматографией?
- Все три метода тонкослойной и колоночной хроматографии используются для разделения биомолекул, таких как аминокислоты, белки и углеводы.
- Методы тонкослойной и колоночной хроматографии имеют подвижную и стационарную фазы.
- В методах тонкослойной и колоночной хроматографии используются биофизические механизмы разделения.
В чем разница между тонкослойной и колоночной хроматографией?
Различать статью в середине перед таблицей
Бумага против тонкого слоя против колоночной хроматографии |
|
| Бумажная хроматография | Бумажная хроматография - это хроматографический метод, используемый для разделения соединений на основе адсорбции жидкость-жидкость и растворимости соединения. В качестве стационарной фазы используется целлюлозная бумага. |
| Тонкослойная хроматография | Тонкослойная хроматография - это еще один хроматографический метод, основанный на адсорбции молекул твердой жидкостью. Он имеет неподвижную фазу, состоящую из оксида алюминия или силикагеля, и растворитель в качестве подвижной фазы, который является растворителем. |
| Колоночная хроматография | В колоночной хроматографии используется колонка, заполненная матрицей, которая используется для разделения молекул в основном на основе их размера, сродства или заряда. |
| Стационарная фаза | |
| Бумажная хроматография | Бумага из нитроцеллюлозы Whatman используется в качестве стационарной фазы в бумажной хроматографии. |
| Тонкослойная хроматография | Оксид алюминия или силикагель используется в качестве стационарной фазы тонкослойной хроматографии. |
| Колоночная хроматография | Колонка, заполненная подходящим насадочным материалом, используется в качестве неподвижной фазы в колоночной хроматографии. |
| Мобильная фаза | |
| Бумажная хроматография | Текущий растворитель - это подвижная фаза бумажной хроматографии. |
| Тонкослойная хроматография | Текущий растворитель - это подвижная фаза тонкослойной хроматографии. |
| Колоночная хроматография | Промывочный буфер - это подвижная фаза колоночной хроматографии. |
| Механизмы, используемые для разделения | |
| Бумажная хроматография | Бумажная хроматография основана на абсорбции твердое вещество-жидкость. |
| Тонкослойная хроматография | Тонкослойная хроматография основана на абсорбции твердое вещество-жидкость. |
| Колоночная хроматография | Колоночная хроматография основана на исключении размера, заряда и формы. |
| Буфер для элюции | |
| Бумажная хроматография | Не требуется для бумажной хроматографии. |
| Тонкослойная хроматография | Не требуется для тонкослойной хроматографии. |
| Колоночная хроматография | Требуется в колоночной хроматографии. |
| Обнаружение | |
| Бумажная хроматография | Окрашивание и определение ретенционного фактора. |
| Тонкослойная хроматография | Окрашивание и определение ретенционного фактора. |
| Колоночная хроматография | Спектрофотометрическое определение. |
Резюме - Тонкий слой бумаги против колоночной хроматографии
Бумажная хроматография, ТСХ и колоночная хроматография - это методы разделения, используемые для разделения биомолекул, таких как белки, аминокислоты и углеводы (в основном моносахариды). В бумажной хроматографии в качестве неподвижной фазы используется целлюлозная бумага, а механизм разделения основан на адсорбции твердой и жидкой фаз. ТСХ также использует механизмы адсорбции твердое вещество-жидкость. Молекулы разделяются на неподвижной фазе в зависимости от их растворимости в подвижной фазе. Колоночная хроматография использует физические свойства, такие как размер, форма, заряд и молекулярная масса соединения для разделения. Колонка, заполненная матричным материалом, действует как неподвижная фаза, тогда как промывочный буфер действует как фаза растворителя. В этом разница между тонкослойной бумагой и колоночной хроматографией.
