Ключевое различие - AFLP против RFLP
Исследования ДНК имеют огромное значение для понимания и определения филогенетических отношений, диагностики генетических заболеваний и картирования геномов организмов. Некоторые методы, связанные с анализом ДНК, также используются для идентификации конкретного гена или последовательности ДНК в пуле неизвестной ДНК. Они известны как молекулярные маркеры. Полиморфизм длины амплифицированного фрагмента (AFLP) и полиморфизм длины рестрикционного фрагмента (RFLP) - два таких молекулярных маркера (методов), разработанных в молекулярной биологии для обнаружения генетической вариации между организмами. Оба метода одинаково важны и имеют свои достоинства и недостатки. Ключевое различие между AFLP и RFLP заключается в том, что AFLP включает селективную ПЦР-амплификацию расщепленной ДНК, в то время как RFLP не включает селективную ПЦР-амплификацию фрагментов ДНК.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и ключевые различия
2. Что такое AFLP
3. Что такое RFLP
4. Сравнение бок о бок - AFLP и RFLP
5. Резюме
Что такое AFLP?
AFLP (полиморфизм длины амплифицированного фрагмента) является важным инструментом в молекулярной биологии и широко используется в анализе генетической изменчивости. AFLP основан на специфической ПЦР-амплификации фрагментированной геномной ДНК и обнаружении полиморфизма авторадиографами с помощью гель-электрофореза. AFLP широко способствует выявлению генетических различий в штаммах или близкородственных видах различных царств, включая растения, животных, бактерии и грибы. AFLP можно проводить с небольшими количествами неизвестных образцов ДНК. Это не требует предварительного знания последовательности и проектирования зондов.
Шаги AFLP
- Выделение ДНК
- Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами
- Лигирование рестриктированных фрагментов ДНК адаптерами
- Селективная амплификация фрагментов со специфическими сайтами рестрикции
- Разделение продуктов ПЦР гель-электрофорезом
- Визуализация гелевой матрицы с помощью авторадиографа
AFLP - более чувствительный и воспроизводимый метод, который можно использовать для профилирования ДНК нескольких таксонов, включая грибы, бактерии, растения и животных, без предварительного знания последовательностей ДНК. Это помогает выявлять небольшие различия между людьми в популяциях из-за его очень чувствительной природы. AFLP также важен при картировании генома, судебно-медицинских исследованиях, родительском тестировании, генотипировании и т. Д.
Рисунок 01: AFLP
Что такое RFLP?
Полиморфизмы длины рестрикционных фрагментов (RFLP) - это метод, который используется для обнаружения генетических вариаций в гомологичных последовательностях ДНК. Это первый метод, разработанный для профилирования ДНК. У организмов есть уникальные отпечатки пальцев ДНК или профили ДНК. ПДРФ служит важным инструментом для анализа различий между профилями ДНК внутривидовых или близкородственных организмов, поскольку гомологичные последовательности имеют разные сайты рестрикции (местоположения), уникальные для конкретного организма. Когда гомологичная ДНК переваривается специфическими эндонуклеазами рестрикции, это приводит к различным профилям ДНК, уникальным для каждого человека. Следовательно,Принцип этого метода заключается в обнаружении генетической изменчивости среди организмов путем ограничения гомологичной ДНК специфическими рестрикционными ферментами и анализа полиморфизма длины фрагментов с помощью гель-электрофореза и блоттинга. Паттерны блоттинга уникальны для каждого организма и характеризуют определенные генотипы.
Этапы ПДРФ
- Выделение достаточного количества ДНК из образцов
- Фрагментация образцов ДНК специфическими эндонуклеазами рестрикции на короткую последовательность
- Разделение полученных фрагментов разной длины электрофорезом в агарозном геле.
- Перенос гелевого профиля на мембрану методом Саузерн-блоттинга
- Гибридизация мембраны с мечеными зондами и анализ полиморфизма длин фрагментов в каждом профиле
ПДРФ - очень важный метод выявления наследственности заболевания и определения риска возникновения заболевания среди членов семьи. RFLP также часто используется при картировании генома, идентификации преступников в криминалистике, проверке отцовства и т. Д. RFLP также имеет несколько ограничений. RFLP требует предварительного знания данных о последовательностях для разработки зондов для гибридизации. Это также требует выделения достаточного количества ДНК из образца для анализа, что сложно в судебно-медицинских исследованиях.
Рисунок 01: Отображение RRFLP
В чем разница между AFLP и RFLP?
Различать статью в середине перед таблицей
ALFP против RFLP |
|
| AFLP включает селективную ПЦР-амплификацию расщепленной ДНК. | ПДРФ не включает ПЦР, если это не ПЦР-ПДРФ. |
| Знание последовательности | |
| Предварительные знания последовательности не требуются. | Для разработки зондов RFLP необходимо предварительное знание последовательности. |
| Надежность | |
| Это более надежно. | Это менее надежно по сравнению с AFLP. |
| Эффективность обнаружения полиморфизма | |
| Он имеет более высокую эффективность при обнаружении полиморфизма, чем RFLP. | Это менее эффективно по сравнению с AFLP. |
| Стоимость | |
| Это немного дороже по сравнению с RFLP. | Это дешевле по сравнению с AFLP. |
| Приложения | |
| AFLP применялись для картирования генома, снятия отпечатков ДНК, исследований генетического разнообразия, тестирования отцовства и судебной экспертизы. | ПДРФ-анализ - важный инструмент в картировании генома, локализации генов генетических нарушений, определении риска заболевания и проверке отцовства. |
Резюме - AFLP против RFLP
AFLP и RFLP - это два метода, которые используются в качестве генетических маркеров для оценки разнообразия и оценки генетических отношений в молекулярной биологии. AFLP служит более эффективным и чувствительным методом обнаружения генетического полиморфизма между организмами, чем RFLP. Однако, хотя оба этих метода имеют разную эффективность при обнаружении генетических вариаций, они все еще используются для снятия отпечатков ДНК и диагностики заболеваний.
