Ключевое различие - переходная и стабильная трансфекция
Трансфекция - это процесс, который участвует в переносе генов эукариотических клеток с использованием химических или физических методов. Трансфекцию можно разделить на два основных типа: временная трансфекция и стабильная трансфекция. Во время временной трансфекции представляющий интерес ген не может интегрироваться с геномом хозяина и экспрессируется временно внутри хозяина в течение короткого времени, тогда как при стабильной трансфекции интересующий ген интегрируется с геномом хозяина и сохраняется в течение длительного времени в нескольких поколениях.. Это ключевое различие между временной и стабильной трансфекцией. В обоих случаях трансфекция проходит успешно, и гены экспрессируются.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные отличия
2. Что такое временная трансфекция
3. Что такое стабильная трансфекция
4. Сравнение бок о бок - временная и стабильная трансфекция
5. Резюме
Что такое временная трансфекция?
Трансфекция - важный инструмент для встраивания генов в эукариотические клетки. Среди этих двух типов трансфекции временная трансфекция является распространенным способом переноса генов. Через вектор чужеродные гены трансформируются внутри клеток-хозяев. Когда чужеродная ДНК попадает в клетку-хозяина, у нее есть два варианта. Он может либо интегрироваться с геномом хозяина и воспроизводиться, либо оставаться внутри без интеграции в геном. Временная трансфекция показывает временную экспрессию вставленных генов без интеграции в геном хозяина. Гены экспрессируют и производят кодированный белок до деления клетки. Однако из-за невозможности интеграции он не может воспроизводиться и передаваться в будущие поколения. Этот тип трансфекции успешен в течение короткого периода времени. Во время деления клетки или из-за каких-либо других факторов чужеродная ДНК подвергается деградации. Временная трансфекция проявляется, когда чужеродная ДНК находится в форме сильно свернутой ДНК.
Рисунок 01: Переходная трансфекция
Что такое стабильная трансфекция?
Стабильная трансфекция показывает успешную интеграцию чужеродного гена в геном хозяина. Как только чужеродная ДНК попадает внутрь клетки-хозяина, часть чужеродной ДНК интегрируется с геномом хозяина и становится его частью. Следовательно, чужеродная ДНК также реплицируется и передается будущим поколениям, когда реплицируется геном хозяина. Этот тип трансфекции сложен и редок. Однако из-за стабильной трансфекции в геном этот признак сохраняется в течение более длительного периода в несколько поколений.
Стабильная трансфекция - сложный процесс, требующий эффективной доставки ДНК и приобретения клетками чужеродной ДНК в свой геном. Следовательно, линейная ДНК способствует стабильной трансфекции, чем кольцевая ДНК. Однако стабильная скорость трансфекции составляет примерно одну из 10 4 трансформированных клеток. Стабильную трансфекцию можно наблюдать путем котрансфомации селектируемого маркера и проведения искусственного отбора на среде.
Рисунок 02: Стабильная трансфекция
В чем разница между переходной и стабильной трансфекцией?
Различать статью в середине перед таблицей
Переходная и стабильная трансфекция |
|
| Чужеродная ДНК не интегрируется в геном хозяина. | Чужеродная ДНК интегрируется с геномом хозяина и становится его частью. |
| Репликация внутри хоста | |
| Кратковременно трансфицированные гены не реплицируются в организме хозяина. Поэтому гены не передаются следующим поколениям. | Гены реплицируются в организме хозяина и передаются будущим поколениям. |
| Продолжительность экспрессии гена | |
| Гены экспрессируются в течение конечного периода времени, после чего они уничтожаются. | Гены становятся частью генома и экспрессируются в поколении в течение длительного периода времени. |
| Использовать | |
| Это полезно для изучения эффектов краткосрочной экспрессии генов или генных продуктов. | Это полезно для долгосрочного изучения эффектов экспрессии генов. |
| Обнаружение трансфекции | |
| Гены экспрессируются и могут быть легко обнаружены путем вставки репортерного гена. | Стабильную трансфекцию можно легко обнаружить, вставив селективный маркер и выбрав путем искусственного отбора на среде. |
| Возникновение и процесс | |
| Транзиторная трансфекция является обычным явлением, и ее несложно выполнить. | Стабильная трансфекция встречается редко и сложна в исполнении. |
| Природа ДНК | |
| ДНК с высокой суперспирализацией подходят для временной трансфекции. | Линейные ДНК подходят для стабильной трансфекции. |
| Приложения | |
| Это используется для исследований нокдауна или сайленсинга генов с помощью ингибирующих РНК, производства белка в небольших масштабах. | Это используется для производства белка в крупномасштабных долгосрочных фармакологических исследованиях, генной терапии, исследованиях механизмов долгосрочной генетической регуляции. |
Резюме - переходная и стабильная трансфекция
Временные и стабильные трансфекции - это два типа трансфекций, которые проявляются во время переноса гена в эукариотические клетки невирусными системами. Трансформированная чужеродная ДНК не интегрируется с геномом хозяина при временной трансфекции, тогда как она интегрируется с геномом хозяина при стабильной трансфекции. ДНК с кольцевой спиралью демонстрирует временную трансфекцию, тогда как линейная ДНК предпочитает стабильную трансфекцию. В этом разница между временной и стабильной трансфекцией. Однако временная трансфекция более распространена и проста по сравнению со стабильной трансфекцией. Но выбор одного из двух зависит от цели переноса гена и продолжительности исследовательского проекта.
