Ключевое различие - горизонтальный и вертикальный гель-электрофорез
Гель-электрофорез - это лабораторный метод, используемый в генетике для разделения смесей, содержащих ДНК, РНК и другие белки, в соответствии с их зарядом и размером молекулы. ДНК, РНК или белки, которые необходимо разделить в этом методе, пропускаются через гель с небольшими порами. Молекулы движутся через гель электрическим полем. Молекулы проходят через поры геля, и скорость движения обратно пропорциональна их длине. Следовательно, молекулы с более низким молекулярным размером будут двигаться быстрее, чем молекулы с более высоким молекулярным весом. Электрическое поле создается разностью зарядов на двух концах геля. Один конец содержит положительный заряд, а другой конец - отрицательный. Поскольку молекулы ДНК и РНК заряжены отрицательно,они будут притягиваться к положительно заряженному концу геля. Гель-электрофорез может быть двух разных методов: горизонтальный гель-электрофорез и вертикальный гель-электрофорез. При горизонтальном гель-электрофорезе гель присутствует в горизонтальной ориентации и погружен в непрерывно работающий буфер, который находится внутри самого гелевого бокса. При вертикальном гель-электрофорезе буферная система ориентирована вертикально и является прерывистой с двумя камерами, расположенными наверху и внизу, с катодом и анодом, соответственно. Это ключевое различие между горизонтальным и вертикальным гель-электрофорезом.гель находится в горизонтальной ориентации и погружен в буфер для непрерывного действия, который находится внутри самого гелевого бокса. При вертикальном гель-электрофорезе буферная система ориентирована вертикально и является прерывистой с двумя камерами, расположенными наверху и внизу, с катодом и анодом, соответственно. Это ключевое различие между горизонтальным и вертикальным гель-электрофорезом.гель находится в горизонтальной ориентации и погружен в буфер для непрерывного действия, который находится внутри самого гелевого бокса. При вертикальном гель-электрофорезе буферная система ориентирована вертикально и является прерывистой с двумя камерами, расположенными наверху и внизу, с катодом и анодом, соответственно. Это ключевое различие между горизонтальным и вертикальным гель-электрофорезом.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные различия
2. Что такое горизонтальный гель-электрофорез
3. Что такое вертикальный гель-электрофорез
4. Сходства между горизонтальным и вертикальным гель-электрофорезом
5. Сравнение бок о бок - горизонтальный и вертикальный гель-электрофорез в табличной форме
6. Заключение
Что такое горизонтальный гель-электрофорез?
Горизонтальный гель-электрофорез использует основную теорию разделения молекул ДНК, РНК или белков в соответствии с их размером и зарядом молекул. В этом методе гель присутствует в горизонтальной ориентации и погружен в непрерывный буфер. Гель агарозы используется для разделения коробки с гелем на два отделения. Один конец гелевой коробки содержит анод, а другой конец - катод. При подаче тока буфер, используемый в этой методике, позволяет создавать градиент заряда. При нанесении заряда гель имеет тенденцию нагреваться. Буфер также действует как охлаждающая жидкость, которая поддерживает температуру на оптимальном уровне. Рециркуляция рабочего буфера предотвращает образование градиента pH. Прерывистую буферную систему нельзя использовать в горизонтальном гель-электрофорезе, поскольку два отсека гелевой системы соединяются с текущим буфером. Акриламид используется во время гель-электрофореза для разделения белковых смесей.
Рисунок 01: Горизонтальный гель-электрофорез
В горизонтальном гель-электрофорезе акриламид нельзя использовать, поскольку гелевый бокс подвергается воздействию кислорода. Из-за присутствия кислорода полимеризация акриламида ингибируется, и это препятствует образованию геля. Горизонтальный гель-электрофорез - это простой метод, который используется для разделения ДНК и РНК.
Что такое вертикальный гель-электрофорез?
Вертикальный гель-электрофорез работает в соответствии с основной теорией гель-электрофореза, но считается более сложным, чем метод горизонтального гель-электрофореза. Этот метод использует прерывистый буфер. Катод расположен в верхней камере, а анод - в нижней камере. Электроды в каждом отсеке создают необходимое электрическое поле. Между двумя установленными стеклянными пластинами наливается тонкий слой геля. Следовательно, верхняя часть геля погружается в верхнюю камеру, а нижняя часть геля погружается в нижнюю камеру. После подачи тока небольшая часть буфера перемещается в нижнюю камеру из верхней камеры через гель. Ток, применяемый в этой технике, измеряется в минутах.
Рисунок 02: Вертикальный гель-электрофорез
При вертикальном гель-электрофорезе буфер проходит только через гель. Это позволяет точно контролировать градиент напряжения на стадии разделения. Акриламидный гель можно использовать, поскольку отсеки не подвергаются воздействию кислорода воздуха. Благодаря меньшему размеру пор акриламидного геля точное разделение может быть достигнуто с более высоким разрешением.
Каковы сходства между горизонтальным и вертикальным гель-электрофорезом?
- Обе системы функционируют согласно основной теории гель-электрофореза.
- Анод и катод используются для создания необходимого электрического поля в обеих системах.
В чем разница между горизонтальным и вертикальным гель-электрофорезом?
Различать статью в середине перед таблицей
Горизонтальный и вертикальный гель-электрофорез |
|
| Горизонтальный гель-электрофорез - это метод гель-электрофореза, при котором гель присутствует в горизонтальной ориентации. | Вертикальный гель-электрофорез - это метод гель-электрофореза, при котором гель ориентируют вертикально. |
| Буфер | |
| Горизонтальный гель-электрофорез состоит из непрерывного буфера. | Текущий буфер прерывается при вертикальном гель-электрофорезе. |
| Использование акриламида | |
| Акриламид нельзя использовать для горизонтального гель-электрофореза, поскольку гелевый бокс подвергается воздействию атмосферного кислорода. | Поскольку гель не подвергается воздействию атмосферного кислорода из-за двух отдельных камер, акриламид можно использовать для вертикального гель-электрофореза. |
| Функция | |
| Горизонтальный гель-электрофорез чаще используется для разделения смесей ДНК и РНК, но не белков. | Вертикальный гель-электрофорез используется для разделения смесей белков. |
Заключение - горизонтальный и вертикальный гель-электрофорез
Гель-электрофорез - это лабораторный метод, который широко используется для разделения смесей, содержащих молекулы ДНК, РНК и белков. Существует два метода гель-электрофореза: горизонтальный и вертикальный гель-электрофорез. При горизонтальном гель-электрофорезе рабочий буфер непрерывен, в то время как при вертикальном гель-электрофорезе он прерывистый. В этом разница между горизонтальным и вертикальным гель-электрофорезом. Обе системы работают по общему принципу гель-электрофореза.
Скачать PDF-версию горизонтального и вертикального гель-электрофореза
Вы можете загрузить PDF-версию этой статьи и использовать ее в автономных целях в соответствии с примечанием к цитированию. Пожалуйста, скачайте PDF-версию здесь. Разница между горизонтальным и вертикальным гель-электрофорезом.
