Разница между теплой и холодной трипсинизацией

2024 Автор: Mildred Bawerman | [email protected]. Последнее изменение: 2023-12-16 08:42

Ключевое различие - теплая и холодная трипсинизация

Теплая и холодная трипсинизация - это два метода, используемых для ферментативной дезагрегации клеток при культивировании клеток животных. Ключевое различие между теплой и холодной трипсинизацией, как следует из названия, зависит от температуры, при которой трипсин добавляется для дезагрегации клеток. Теплая трипсинизация происходит в условиях более высоких температур (36,5 - 37 ⁰ C), тогда как холодная трипсинизация происходит в условиях низких температур.

В процессе первичного культивирования клеток животных используются три основных метода, которые оказались успешными. Эти три метода включают механическую дезагрегацию клеток, ферментативную дезагрегацию клеток и метод первичного эксплантата. Ферментативная дезагрегация клеток, ведущая к изоляции клеток, осуществляется расщепляющим белок ферментом трипсином. Поэтому этот процесс известен как трипсинизация. Трипсинизацию можно проводить в двух различных условиях, а именно: теплая трипсинизация и холодная трипсинизация. Теплая трипсинизация - это метод обработки клеток трипсином в теплых условиях при температуре 36,5 - 37 ^0С.C. Холодная трипсинизация - это процесс обработки трипсином, который происходит в более холодных условиях, предпочтительно во льду при очень низких температурах.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Обзор и основные отличия

2. Что такое теплая трипсинизация

3. Что такое холодная трипсинизация

4. Сходства между теплой и холодной трипсинизацией

5. Сравнение бок о бок - теплая и холодная трипсинизация в табличной форме

6. Резюме

Что такое теплая трипсинизация?

Трипсинизация может быть проведена для дезагрегирования клеточных компонентов, чтобы изолировать клетки для получения первичной клеточной культуры. Трипсин представляет собой фермент разложения белка, и смесь ферментов, используемая при трипсинизации, может быть либо неочищенным экстрактом, либо очищенным продуктом. Неочищенный экстракт считается более эффективным в отношении лизиса белка и дезинтеграции клеток, поскольку он содержит другие разрушающие ферменты.

Теплая трипсинизация - наиболее часто используемый ферментативный метод дезагрегации клеток, который происходит в условиях более высоких температур. Перед обработкой трипсинизацией желаемая ткань измельчается на более мелкие кусочки. Это облегчает процесс разукрупнения. Затем измельченные ткани промывают в специальной среде, известной как среда Dissection Basal Salt.

По завершении стадии промывки клетки трансформируют в колбу, содержащую активный фермент, которым является трипсин. Поскольку эта методика подразумевает теплый протокол трипсина, трипсин помещают при температуре около 37 ⁰ С в течение приблизительно четыре часов.

Разница между теплой и холодной трипсинизацией

Рисунок 01: Трипсин

Содержимое перемешивают и взбалтывают с использованием методов центрифугирования для упрощения протокола и ускорения процесса дезагрегации. По достижении рекомендованного времени клетки могут быть получены из супернатанта. Затем клетки, полученные из супернатанта, инкубируют при определенной температуре и времени.

Что такое холодная трипсинизация?

Холодная трипсинизация - это еще один тип трипсинизации, который происходит в холодных условиях. В этом методе измельченные и промытые клетки помещаются во флаконы на льду, а затем пропитываются трипсином. Период замачивания намного больше - около 6-24 часов.

После завершения процедуры замачивания, трипсин удаляет из клеточного лизата, и кусочки ткани дополнительно инкубировали при 37 ⁰ С в течение приблизительно 20 - 30 минут. Дезагрегация клеток вызывается повторным пипетированием тканевой смеси. Это позволит клеткам отделиться от мембраны и перейти в супернатант. Когда клетки попадают в супернатант, их инкубируют и выращивают при желаемой температуре и периоде времени.

Метод холодной трипсинизации имеет ряд преимуществ.

Более высокий выход жизнеспособных клеток, поскольку повреждение клеток сведено к минимуму. Повреждение клеток сводится к минимуму, если не использовать этапы центрифугирования.
Очень удобный метод.
Менее трудоемкий.

Основное ограничение метода холодной трипсинизации состоит в том, что нельзя использовать большие количества в одном экземпляре.

Каковы сходства между теплой и холодной трипсинизацией?

В процессах теплой и холодной трипсинизации для дезагрегации клеток используется фермент трипсин.
Процессы теплой и холодной трипсинизации используются в процедурах культивирования клеток для дезагрегации клеток.
В процедурах обработки как теплой, так и холодной трипсинизацией клетки получают из супернатанта.

В чем разница между теплой и холодной трипсинизацией?

Различать статью в середине перед таблицей

Теплая и холодная трипсинизация
Теплая трипсинизация - это метод обработки клеток трипсином в теплых условиях при температуре 36,5 - 37 ⁰.	Холодная трипсинизация - это процесс обработки трипсином, который происходит в более холодных условиях, предпочтительно во льду, поддерживающем очень низкие температуры.
Протокол
Измельченные кусочки ткани выдерживают при 37 ⁰ С непрерывно в течение всей процедуры.	Измельченные кусочки ткани первоначально выдерживают при ледяной температуре, а затем выдерживали при 37 ⁰.
Температура
Теплая трипсинизация происходит при 36,5 - 37 ⁰	Холодная трипсинизация происходит при ледяных температурах.
Затраченное время
Меньше времени требуется на весь процесс (около 4 часов) теплой трипсинизации.	Для холодной трипсинизации требуется больше времени (около 6–24 часов).
Выход жизнеспособных клеток
Низкий уровень теплой трипсинизации.	Высокая холодовая трипсинизация.
Использование центрифугирования
Центрифугирование требуется для дезагрегации клеток при теплой трипсинизации.	При холодной трипсинизации центрифугирование не требуется.
Исходное количество ткани для трипсинизации
При теплой трипсинизации можно использовать большее количество ткани.	При холодной трипсинизации можно использовать меньшее количество ткани.
Повреждение клеток
Высокая из-за центрифугирования при теплой трипсинизации.	Меньше из-за холодной трипсинизации.

Резюме - теплая и холодная трипсинизация

Трипсинизация - это метод использования расщепляющего белок фермента трипсина для дезагрегации и подготовки первичных культур клеток в процессе культивирования клеток. Существует два основных метода трипсинизации в зависимости от температуры, используемой во время процедуры. Они бывают теплой и холодной трипсинизацией. Теплые трипсинизации проводят при 37 ⁰ С, тогда как холодные трипсинизациями проводят при охлаждении льда в холодных условиях. Хотя холодная трипсинизация занимает больше времени для завершения, считается, что она дает более высокий выход жизнеспособных клеток. Это связано с тем, что при холодной трипсинизации повреждение клеток сводится к минимуму, поскольку при этом не используются этапы интенсивного центрифугирования. В этом разница между теплой и холодной трипсинизацией.