Ключевое различие - теплая и холодная трипсинизация
Теплая и холодная трипсинизация - это два метода, используемых для ферментативной дезагрегации клеток при культивировании клеток животных. Ключевое различие между теплой и холодной трипсинизацией, как следует из названия, зависит от температуры, при которой трипсин добавляется для дезагрегации клеток. Теплая трипсинизация происходит в условиях более высоких температур (36,5 - 37 0 C), тогда как холодная трипсинизация происходит в условиях низких температур.
В процессе первичного культивирования клеток животных используются три основных метода, которые оказались успешными. Эти три метода включают механическую дезагрегацию клеток, ферментативную дезагрегацию клеток и метод первичного эксплантата. Ферментативная дезагрегация клеток, ведущая к изоляции клеток, осуществляется расщепляющим белок ферментом трипсином. Поэтому этот процесс известен как трипсинизация. Трипсинизацию можно проводить в двух различных условиях, а именно: теплая трипсинизация и холодная трипсинизация. Теплая трипсинизация - это метод обработки клеток трипсином в теплых условиях при температуре 36,5 - 37 0С.C. Холодная трипсинизация - это процесс обработки трипсином, который происходит в более холодных условиях, предпочтительно во льду при очень низких температурах.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные отличия
2. Что такое теплая трипсинизация
3. Что такое холодная трипсинизация
4. Сходства между теплой и холодной трипсинизацией
5. Сравнение бок о бок - теплая и холодная трипсинизация в табличной форме
6. Резюме
Что такое теплая трипсинизация?
Трипсинизация может быть проведена для дезагрегирования клеточных компонентов, чтобы изолировать клетки для получения первичной клеточной культуры. Трипсин представляет собой фермент разложения белка, и смесь ферментов, используемая при трипсинизации, может быть либо неочищенным экстрактом, либо очищенным продуктом. Неочищенный экстракт считается более эффективным в отношении лизиса белка и дезинтеграции клеток, поскольку он содержит другие разрушающие ферменты.
Теплая трипсинизация - наиболее часто используемый ферментативный метод дезагрегации клеток, который происходит в условиях более высоких температур. Перед обработкой трипсинизацией желаемая ткань измельчается на более мелкие кусочки. Это облегчает процесс разукрупнения. Затем измельченные ткани промывают в специальной среде, известной как среда Dissection Basal Salt.
По завершении стадии промывки клетки трансформируют в колбу, содержащую активный фермент, которым является трипсин. Поскольку эта методика подразумевает теплый протокол трипсина, трипсин помещают при температуре около 37 0 С в течение приблизительно четыре часов.
Рисунок 01: Трипсин
Содержимое перемешивают и взбалтывают с использованием методов центрифугирования для упрощения протокола и ускорения процесса дезагрегации. По достижении рекомендованного времени клетки могут быть получены из супернатанта. Затем клетки, полученные из супернатанта, инкубируют при определенной температуре и времени.
Что такое холодная трипсинизация?
Холодная трипсинизация - это еще один тип трипсинизации, который происходит в холодных условиях. В этом методе измельченные и промытые клетки помещаются во флаконы на льду, а затем пропитываются трипсином. Период замачивания намного больше - около 6-24 часов.
После завершения процедуры замачивания, трипсин удаляет из клеточного лизата, и кусочки ткани дополнительно инкубировали при 37 0 С в течение приблизительно 20 - 30 минут. Дезагрегация клеток вызывается повторным пипетированием тканевой смеси. Это позволит клеткам отделиться от мембраны и перейти в супернатант. Когда клетки попадают в супернатант, их инкубируют и выращивают при желаемой температуре и периоде времени.
Метод холодной трипсинизации имеет ряд преимуществ.
- Более высокий выход жизнеспособных клеток, поскольку повреждение клеток сведено к минимуму. Повреждение клеток сводится к минимуму, если не использовать этапы центрифугирования.
- Очень удобный метод.
- Менее трудоемкий.
Основное ограничение метода холодной трипсинизации состоит в том, что нельзя использовать большие количества в одном экземпляре.
Каковы сходства между теплой и холодной трипсинизацией?
- В процессах теплой и холодной трипсинизации для дезагрегации клеток используется фермент трипсин.
- Процессы теплой и холодной трипсинизации используются в процедурах культивирования клеток для дезагрегации клеток.
- В процедурах обработки как теплой, так и холодной трипсинизацией клетки получают из супернатанта.
В чем разница между теплой и холодной трипсинизацией?
Различать статью в середине перед таблицей
Теплая и холодная трипсинизация |
|
| Теплая трипсинизация - это метод обработки клеток трипсином в теплых условиях при температуре 36,5 - 37 0. | Холодная трипсинизация - это процесс обработки трипсином, который происходит в более холодных условиях, предпочтительно во льду, поддерживающем очень низкие температуры. |
| Протокол | |
| Измельченные кусочки ткани выдерживают при 37 0 С непрерывно в течение всей процедуры. | Измельченные кусочки ткани первоначально выдерживают при ледяной температуре, а затем выдерживали при 37 0. |
| Температура | |
| Теплая трипсинизация происходит при 36,5 - 37 0 | Холодная трипсинизация происходит при ледяных температурах. |
| Затраченное время | |
| Меньше времени требуется на весь процесс (около 4 часов) теплой трипсинизации. | Для холодной трипсинизации требуется больше времени (около 6–24 часов). |
| Выход жизнеспособных клеток | |
| Низкий уровень теплой трипсинизации. | Высокая холодовая трипсинизация. |
| Использование центрифугирования | |
| Центрифугирование требуется для дезагрегации клеток при теплой трипсинизации. | При холодной трипсинизации центрифугирование не требуется. |
| Исходное количество ткани для трипсинизации | |
| При теплой трипсинизации можно использовать большее количество ткани. | При холодной трипсинизации можно использовать меньшее количество ткани. |
| Повреждение клеток | |
| Высокая из-за центрифугирования при теплой трипсинизации. | Меньше из-за холодной трипсинизации. |
Резюме - теплая и холодная трипсинизация
Трипсинизация - это метод использования расщепляющего белок фермента трипсина для дезагрегации и подготовки первичных культур клеток в процессе культивирования клеток. Существует два основных метода трипсинизации в зависимости от температуры, используемой во время процедуры. Они бывают теплой и холодной трипсинизацией. Теплые трипсинизации проводят при 37 0 С, тогда как холодные трипсинизациями проводят при охлаждении льда в холодных условиях. Хотя холодная трипсинизация занимает больше времени для завершения, считается, что она дает более высокий выход жизнеспособных клеток. Это связано с тем, что при холодной трипсинизации повреждение клеток сводится к минимуму, поскольку при этом не используются этапы интенсивного центрифугирования. В этом разница между теплой и холодной трипсинизацией.
