ПЦР против ПЦР в реальном времени
ПЦР или полимеразная цепная реакция - это революционное открытие в современной молекулярной биологии, которое впервые было разработано химиком Кэри Муллис в 1983 году. Она позволяет амплифицировать одну последовательность в сложной ДНК для анализа. Основная идея ПЦР состоит в том, что два праймера, которые комплементарны противоположным цепям последовательности ДНК, ориентированы друг к другу; праймеры образуют комплементарные цепи, каждая из которых содержит другой праймер. Следовательно, результатом является большое количество последовательности, соответствующей ДНК, которая находится между двумя праймерами. Фермент ДНК-полимераза используется для удлинения праймеров в ПЦР. ДНК-полимераза - это термостабильный фермент, способный выживать при высоких температурах (от 94 до 95 ° C), используемых для денатурации матричной ДНК.
ПЦР включает три этапа, а именно повторные раунды денатурации, отжиг праймеров и синтез ДНК. Для проведения этой реакции используется термоциклер, поэтому его можно запрограммировать на быстрое и точное изменение температуры. Применения ПЦР - уголовные расследования, отпечатки пальцев ДНК, обнаружение патогенов и анализ ДНК ранних видов человека.
Что такое обычная ПЦР?
Есть три основных этапа традиционной ПЦР, а именно; Этап амплификации ДНК, разделение ПЦР и обнаружение продуктов. Разделение сегментов ДНК обычно проводят электрофорезом в агарозном геле. Затем продукты окрашивают бромидом этидуима. Наконец, обнаружение достигается путем визуализации полос на гелях в УФ-свете. Следовательно, окончательные результаты обычной ПЦР не выражаются в виде чисел. Обычно обычная ПЦР способна обнаружить только один параметр.
Что такое ПЦР в реальном времени?
ПЦР в реальном времени позволяет обнаруживать амплификацию продуктов по мере их синтеза. С развитием технологий ПЦР стала очень популярной техникой, особенно для обнаружения и идентификации бактерий в пищевых продуктах. ПЦР в реальном времени использует систему флуоресцентного красителя и термоциклер, оборудованный функцией флуоресцентного обнаружения.
В чем разница между обычной ПЦР и ПЦР в реальном времени?
• Обычная ПЦР требует больше времени, так как в ней используется гель-электрофорез для анализа амплифицированных продуктов ПЦР. Напротив, ПЦР в реальном времени занимает меньше времени, поскольку может обнаруживать амплификации на ранних этапах реакции.
• ПЦР в реальном времени собирает данные в фазе экспоненциального роста ПЦР, в то время как традиционная ПЦР собирает данные в конечной точке реакции.
• Результаты конечной точки обычной ПЦР могут быть не очень точными, но результаты ПЦР в реальном времени очень точны.
• ПЦР в реальном времени более чувствительна, чем обычная ПЦР.
• Обычная ПЦР имеет очень низкое разрешение, в то время как ПЦР в реальном времени может обнаружить очень незначительные изменения из-за высокого разрешения.
• Обнаружение конечной точки обычной ПЦР имеет короткий динамический диапазон, тогда как обнаружение ПЦР в реальном времени имеет широкий динамический диапазон.
• В отличие от обычной ПЦР, автоматические методы обнаружения используются в ПЦР в реальном времени.
• Обычная ПЦР очень сложна и трудозатратнее, чем ПЦР в реальном времени.
• В отличие от ПЦР в реальном времени, обычная ПЦР не позволяет отличить мертвые бактерии от живых.
• ПЦР в реальном времени использует систему флуоресцентных красителей для обнаружения продуктов, в то время как обычная ПЦР использует бромид этидия и УФ-свет для визуализации полос в среде геля агарозы.
