Ключевое различие - прямой и непрямой ИФА
Иммуноферментный иммуноферментный анализ (ИФА), также известный как иммуноферментный анализ, представляет собой серологический тест, который выявляет антитела в крови. Он используется в качестве диагностического инструмента, чтобы узнать, подвергался ли пациент воздействию определенного типа вируса или другого инфекционного агента (антигена) и вырабатывал ли организм антитела против инфекции. ELISA может также идентифицировать прошлые и текущие инфекции. Таким образом, ИФА часто используется врачами в качестве предварительного скринингового теста перед углубленным анализом заболеваний. Этот тест можно провести в лаборатории, взяв у пациента образец крови. Существует два типа теста ELISA: прямой ELISA и непрямой ELISA. Ключевое различие между прямым и непрямым ИФА состоит в том, что непрямой ИФА более чувствителен и требует добавления вторичных антител, в то время как прямой ИФА менее чувствителен и использует только первичные антитела.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Обзор и основные отличия
2. Что такое прямой ИФА
3. Что такое непрямой ИФА
4. Параллельное сравнение - прямой и непрямой ИФА
5. Резюме
Что такое прямой ИФА?
ELISA - это диагностический тест, выполняемый для определения наличия определенных антигенов или антител в крови. Это делается в виде планшета. Он использует антитела, связанные с легко анализируемыми ферментами. Присутствие антигенов в образце сыворотки связывается со специфическими антителами, связанными с ферментами. На последнем этапе добавляется особый субстрат для взаимодействия с ферментом. Фермент превращает субстрат в окрашенный или сигнализирующий продукт. Изменение цвета химического субстрата указывает на присутствие определенного антитела в образце сыворотки. Прямой тест ELISA использует только первичные антитела, связанные с ферментом. При связывании с антигеном он быстро меняет цвет, что свидетельствует о наличии инфекционного агента в крови. Однако,интенсивность сигналов слабее в прямом ИФА, поскольку эпитопы ограничены связыванием антигенов. Следовательно, прямой ELISA менее чувствителен по сравнению с непрямым ELISA.
Рисунок 01: Прямой тест ELISA
Что такое непрямой ИФА?
ELISA может быть выполнен с использованием двух типов антител, а именно; первичное антитело и вторичное антитело. Инструмент непрямого ИФА использует оба типа антител для усиления сигналов для лучшего обнаружения. Непрямой метод ELISA выполняется следующим образом.
- Планшеты инкубируют с антигенами и промывают для блокирования неспецифического связывания.
- Затем добавляются первичные антитела и промываются.
- Добавляют связанное с ферментом вторичное антитело и промывают.
- Добавляют субстрат и дают ему возможность взаимодействовать с ферментами.
- Обнаруживаются сигналы, и определяется наличие или отсутствие специфического антигена в образце.
В непрямом ИФА тесте несколько вторичных антител могут связываться с одним первичным антителом. Вторичные антитела связаны с легко анализируемыми ферментами. Следовательно, одно связывание может давать сильный сигнал из-за более чем одного взаимодействия. Следовательно, непрямой ELISA более чувствителен, чем прямой ELISA. Однако непрямой ELISA может давать неспецифические сигналы из-за перекрестных реакций вторичных антител.
Рисунок 02: Непрямой тест ELISA
В чем разница между прямым и непрямым ИФА?
Различать статью в середине перед таблицей
Прямой и непрямой ИФА |
|
| Прямой ИФА менее чувствителен по сравнению с непрямым ИФА. | Непрямой ИФА более чувствителен. |
| Затраченное время | |
| Прямой тест ELISA - это быстрый процесс. | Косвенный ИФА требует много времени. |
| Использование антител | |
| В прямом ИФА используется только один тип антител (первичные антитела). | Первичные и вторичные антитела используются для непрямого ELISA. |
| Связь с ферментами | |
| Первичные антитела связаны с ферментами. | Вторичные антитела связаны с ферментами. |
| Перекрестная реактивность вторых антител | |
| Прямой ELISA исключает перекрестную реактивность вторых антител. | На непрямой ELISA влияет перекрестная реактивность вторых антител. |
| Сигналы | |
| Сигналы слабые по сравнению с непрямым ИФА. | Сигналы усиливаются в непрямом ИФА. Следовательно, его легко обнаружить. |
Резюме - Прямой и непрямой ИФА
ELISA - это биохимический метод, используемый в основном в иммунологии для обнаружения наличия антител или антигена в образце крови пациента. Это может быть выполнено с помощью двух процессов, известных как прямой или непрямой ELISA. Прямой тест ELISA использует только первичные антитела для обнаружения антигена, тогда как непрямой ELISA использует как первичные, так и вторичные антитела. В прямом ELISA метят первичные антитела, тогда как в непрямом ELISA метят вторичные антитела. В этом разница между прямым и непрямым ИФА.
