Разница между прямым и непрямым ИФА

2024 Автор: Mildred Bawerman | [email protected]. Последнее изменение: 2023-12-16 08:42

Ключевое различие - прямой и непрямой ИФА

Иммуноферментный иммуноферментный анализ (ИФА), также известный как иммуноферментный анализ, представляет собой серологический тест, который выявляет антитела в крови. Он используется в качестве диагностического инструмента, чтобы узнать, подвергался ли пациент воздействию определенного типа вируса или другого инфекционного агента (антигена) и вырабатывал ли организм антитела против инфекции. ELISA может также идентифицировать прошлые и текущие инфекции. Таким образом, ИФА часто используется врачами в качестве предварительного скринингового теста перед углубленным анализом заболеваний. Этот тест можно провести в лаборатории, взяв у пациента образец крови. Существует два типа теста ELISA: прямой ELISA и непрямой ELISA. Ключевое различие между прямым и непрямым ИФА состоит в том, что непрямой ИФА более чувствителен и требует добавления вторичных антител, в то время как прямой ИФА менее чувствителен и использует только первичные антитела.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Обзор и основные отличия

2. Что такое прямой ИФА

3. Что такое непрямой ИФА

4. Параллельное сравнение - прямой и непрямой ИФА

5. Резюме

Что такое прямой ИФА?

ELISA - это диагностический тест, выполняемый для определения наличия определенных антигенов или антител в крови. Это делается в виде планшета. Он использует антитела, связанные с легко анализируемыми ферментами. Присутствие антигенов в образце сыворотки связывается со специфическими антителами, связанными с ферментами. На последнем этапе добавляется особый субстрат для взаимодействия с ферментом. Фермент превращает субстрат в окрашенный или сигнализирующий продукт. Изменение цвета химического субстрата указывает на присутствие определенного антитела в образце сыворотки. Прямой тест ELISA использует только первичные антитела, связанные с ферментом. При связывании с антигеном он быстро меняет цвет, что свидетельствует о наличии инфекционного агента в крови. Однако,интенсивность сигналов слабее в прямом ИФА, поскольку эпитопы ограничены связыванием антигенов. Следовательно, прямой ELISA менее чувствителен по сравнению с непрямым ELISA.

Рисунок 01: Прямой тест ELISA

Что такое непрямой ИФА?

ELISA может быть выполнен с использованием двух типов антител, а именно; первичное антитело и вторичное антитело. Инструмент непрямого ИФА использует оба типа антител для усиления сигналов для лучшего обнаружения. Непрямой метод ELISA выполняется следующим образом.

1. Планшеты инкубируют с антигенами и промывают для блокирования неспецифического связывания.
2. Затем добавляются первичные антитела и промываются.
3. Добавляют связанное с ферментом вторичное антитело и промывают.
4. Добавляют субстрат и дают ему возможность взаимодействовать с ферментами.
5. Обнаруживаются сигналы, и определяется наличие или отсутствие специфического антигена в образце.

В непрямом ИФА тесте несколько вторичных антител могут связываться с одним первичным антителом. Вторичные антитела связаны с легко анализируемыми ферментами. Следовательно, одно связывание может давать сильный сигнал из-за более чем одного взаимодействия. Следовательно, непрямой ELISA более чувствителен, чем прямой ELISA. Однако непрямой ELISA может давать неспецифические сигналы из-за перекрестных реакций вторичных антител.

Рисунок 02: Непрямой тест ELISA

В чем разница между прямым и непрямым ИФА?

Различать статью в середине перед таблицей

Прямой и непрямой ИФА
Прямой ИФА менее чувствителен по сравнению с непрямым ИФА.	Непрямой ИФА более чувствителен.
Затраченное время
Прямой тест ELISA - это быстрый процесс.	Косвенный ИФА требует много времени.
Использование антител
В прямом ИФА используется только один тип антител (первичные антитела).	Первичные и вторичные антитела используются для непрямого ELISA.
Связь с ферментами
Первичные антитела связаны с ферментами.	Вторичные антитела связаны с ферментами.
Перекрестная реактивность вторых антител
Прямой ELISA исключает перекрестную реактивность вторых антител.	На непрямой ELISA влияет перекрестная реактивность вторых антител.
Сигналы
Сигналы слабые по сравнению с непрямым ИФА.	Сигналы усиливаются в непрямом ИФА. Следовательно, его легко обнаружить.

Резюме - Прямой и непрямой ИФА

ELISA - это биохимический метод, используемый в основном в иммунологии для обнаружения наличия антител или антигена в образце крови пациента. Это может быть выполнено с помощью двух процессов, известных как прямой или непрямой ELISA. Прямой тест ELISA использует только первичные антитела для обнаружения антигена, тогда как непрямой ELISA использует как первичные, так и вторичные антитела. В прямом ELISA метят первичные антитела, тогда как в непрямом ELISA метят вторичные антитела. В этом разница между прямым и непрямым ИФА.